Питер Паркер, осиротевший в раннем возрасте из-за таинственного исчезновения родителей, растет под опекой дяди Бена и тети Мэй. Его жизнь типична для старшеклассника: учеба, насмешки сверстников и безответная любовь к Гвен Стейси, дочери капитана полиции. Внезапно Питер находит в подвале дома старый портфель отца, который приводит его к секретной лаборатории, где он обнаруживает следы экспериментов с генной инженерией. Именно там его кусает генетически модифицированный паук, наделяя парня невероятной силой, ловкостью и способностью передвигаться по вертикальным поверхностям.
После трагической гибели дяди Бена от рук грабителя, которого Питер мог остановить, но не сделал этого, он осознает свою ответственность. Парень создает костюм и начинает патрулировать улицы Нью-Йорка, выслеживая преступников. Вскоре он сталкивается с загадочным злодеем, известным как Ящер, который сеет хаос в городе. Оказывается, что этот монстр — бывший коллега отца Питера, доктор Курт Коннорс, пытавшийся создать формулу регенерации конечностей. Питер вынужден не только сражаться с мутировавшим ученым, но и разгадать тайну исчезновения своих родителей, которая напрямую связана с разработками Коннорса. В финальной схватке на небоскребе он использует свои новые способности, чтобы остановить Ящера и защитить Гвен, чей отец узнает правду о личности супергероя.